比利时杜鹃类黄酮3-O-糖基转移酶基因的克隆、原核表达及功能分析
简介：类黄酮3-O-糖基转移酶是植物花青素糖苷化的关键酶.为研究杜鹃花3GT基因的功能,本研究从红比利时杜鹃中克隆了一个3GT基因开放阅读框(open reading frame,ORF)命名为Rh3GT,分析、测定并验证了该ORF及其编码蛋白的理化性质、表达水平、酶学功能等生物学特性.结果表明,Rh3GT全长993 bp,编码330个氨基酸;编码蛋白为亲水稳定的弱酸性蛋白,隶属糖基转移酶家族(GT-B型),PSPG box结构域中第44位为谷氨酰胺(Q);系统进化分析发现比利时杜鹃Rh3GT与越橘Vc3GT和黑果越橘Vm3GT的亲缘关系最近;Rh3GT在根中几乎不表达,在茎、叶、花中均有表达,且在盛开期花瓣中表达量最高;花瓣瞬时过表达Rh3GT后发现其总花青苷积累也显著增加;Rh3GT重组蛋白在大肠杆菌BL21中成功表达,并以包涵体形式存在,大小约为36kDa,与理论预测值接近;高效液相色谱检测发现,经过变性纯化和稀释复性后的Rh3GT重组蛋白可催化矢车菊素和UDP-葡萄糖合成矢车菊素3-O-葡萄糖苷,表明表达的蛋白具有3GT活性.本研究为深入探讨杜鹃花花青苷生物合成分子调控机制提供了基础数据,并为潜在的杜鹃花分子育种提供了理论支持.展开
学者：鄢毅铖吴泽航姜宇航胡高源杨宇杰谢晓鸿吴月燕贾永红
关键词：比利时杜鹃类黄酮3-O-糖基转移酶表达分析瞬时过表达原核表达
在线出版日期：2025-03-12 （网站首发日期）
